Empleo del ELISA indirecto para el diagnóstico de la infestación por Cephenemyia stimulator en corzos

Abstract

La cefenemiosis en corzos, causada por el díptero Cephenemyia stimulator, desde su primer caso citado en España en 2001, ha aumentado su prevalencia a gran velocidad por todo el Norte peninsular. La necropsia está considerada como el método de referencia o "gold standard" para el diagnóstico de esta miasis nasofaríngea. No obstante, el empleo de esta técnica se restringe a la época de caza autorizada para este ungulado y a casos esporádicos de animales encontrados muertos. Por ello, en las últimas décadas varios autores han estado trabajando en métodos de diagnóstico que permitan la detección "in vivo" 2del parásito y que reflejen mejor la dinámica anual de la enfermedad, apostando principalmente por el ELISA indirecto (ELISAi). En este estudio se pretende determinar qué antígeno larvario de C. stimulator aporta mejores resultados para la detección de anticuerpos específicos frente al parásito, así como desarrollar y validar un protocolo de ELISAi para estudiar la seroprevalencia y epidemiología de esta miasis en distintas zonas de la península ibérica. Para ello se recogieron cabezas y sueros de 137 de corzos de 9 regiones del norte de España y Portugal. Se obtuvieron 3 antígenos somáticos mediante triturado de las larvas 1 (L1), L2 y L3 y dos antígenos de excreción-secreción mediante la incubación de L1 y L3 en medio de cultivo RPMI. Para la puesta a punto del ELISAi se empleó una mezcla de sueros de corzos negativos procedentes de zonas indemnes (testigo negativo) y una mezcla de sueros de corzos que albergaban larvas de C. stimulator (testigo positivo) Los antígenos somáticos(AgS) ofrecieron una mayor diferencia entre la absorbancia de los testigo positivo y negativo por lo que se consideraron más adecuados para el inmunodiagnóstico de la enfermedad. Al correlacionar los resultados del ELISAi con la necropsia, se vio que el ELISAi con AgS L1 presentaba un grado de correlación muy bueno con la necropsia con un índice de kappa de 0,886, mientras que la existente con los AgS L2 (ĸ =0,429) y L3 (ĸ =0,413) fue moderada. Asimismo, se comprobó que el ELISAi con AgS L1 ofrecía los mejores valores de sensibilidad (96,6%) y especificidad (91,5%) y unos valores predictivos positivo (95,6%) y negativo (93,5%), considerablemente elevados, por lo que se consideró la prueba más adecuada para llevar a cabo el inmunodiagnóstico de la cefenemiosis del corzo. Mediante el ELISAi con AgS L1 se obtuvo una seroprevalencia total del 66,4% en los corzos analizados, siendo muy similar a la prevalencia obtenida mediante necropsia (65,7%). Al estudiar la influencia de distintos factores de riesgo (edad, sexo, región), únicamente se detectaron diferencias significativas en función de la procedencia, siendo la seroprevalencia en Galicia significativamente superior a la de Cantabria y norte de Portugal.