Desarrollo de métodos in vitro para la detección de biotoxinas emergentes en aguas europeas

Abstract

En los últimos años, el cambio climático y el exceso de gases de efecto invernadero en la atmósfera han hecho que la temperatura terrestre y oceánica haya aumentado, cambiando las características fisicoquímicas de las aguas marinas. Este hecho, combinado con la globalización del comercio, ha permitido que microrganismos como el fitoplancton invadan aguas donde antes no podían habitar y, en consecuencia, que aparezcan nuevos peligros para la salud pública, como son las biotoxinas marinas. Se han descubierto muchas biotoxinas marinas, pero este estudio se ha centrado en las biotoxinas marinas emergentes en Europa y por ende en las costas gallegas, entre las que se incluyen la tetrodotoxina (TTX) y las ciguatoxinas (CTXs). Estas toxinas son muy peligrosas para las personas y todavía no existe ningún método de diagnóstico médico rápido, práctico y fiable ni ningún tratamiento efectivo para las intoxicaciones producidas por las mismas. Por ello, este Trabajo Fin de Grado se ha centrado en esta temática, evaluando la interacción de un anticuerpo experimental anti-TTX con esta toxina y con los canales de sodio dependientes de voltaje (CSDV) y perfeccionando un método de cuantificación biológica de la ciguatoxina P-CTX-3C. Los estudios realizados han sido in vitro, empleando para ello distintas líneas celulares. Para evaluar la interacción del anticuerpo con la tetrodotoxina y los CSDV se ha utilizado la técnica del patch-clamp y la inmunocitoquímica, mientras que para perfeccionar un método de cuantificación para la P-CTX-3C se han utilizado los ensayos de citotoxicidad evaluando la actividad mitocondrial empleando sales de tetrazolio (MTT) o Alamar Blue, reevaluando métodos descritos por otros autores. Los resultados obtenidos han sido que el anticuerpo anti-TTX se une a los CSDV de las células tratadas previamente con TTX 1 µM durante 1 hora y que disminuyen las corrientes registradas en el patch-clamp de células vivas, además de impedir que la toxina se una a su lugar de acción. En cuanto a los estudios de citotoxicidad, no se ha podido determinar la concentración de ouabaína y veratridina no tóxica para las células debido a los resultados contradictorios registrados en los ensayos de citotoxicidad. Se concluye que el anticuerpo experimental anti-TTX se podría utilizar para diseñar inmunoensayos de detección de intoxicaciones ocasionadas por TTX en personas y animales, mientras que se necesitan más estudios para establecer un método estándar de cuantificación biológica de las ciguatoxinas.