Inmunolocalización de anticuerpos de proliferación celular, apoptosis y citoesqueleto en el intestino del pez cebra

Abstract

[ESP] El auge de la acuicultura ha resaltado la necesidad de comprender y optimizar la salud intestina de los peces, ya que el intestino constituye una interfaz crucial entre el medio interno y externo. Las alteraciones, tanto en el medio externo como en el interno, pueden tener repercusiones negativas en la salud general de los animales de producción, lo que subraya la importancia de reforzar la salud intestinal. En este contexto, el pez cebra ha emergido como un modelo valioso en acuicultura, permitiendo la evaluación de dietas y aditivos dietéticos de manera más eficiente y económica que las pruebas directas en los animales de producción. En el presente trabajo, se ha utilizado esta especie como organismo modelo, para la evaluación de distintos marcadores relativos a la salud intestinal empleando la técnica inmunohistoquímica. En concreto, el objetivo de este este trabajo es la puesta a punto de técnicas inmunohistoquímicas para la detección de caspasa 3, antígeno nuclear de células en proliferación (PCNA), citoqueratina AE1/AE3 y Ecadherina, en cortes histológicos de intestino de pez cebra, dado que los protocolos comerciales no estaban probados para esta especie. El estudio mostró que el PCNA se localiza principalmente entre los pliegues intestinales, áreas ricas en células indiferenciadas, indicando alta proliferación. La caspasa 3, un marcador de apoptosis, se encontró en células individuales distribuidas multifocalmente a lo largo del pliegue. La E-cadherina se observó en las áreas de contacto entre las células del epitelio, reflejando su papel en la adhesión celular. Por último, la citoqueratina AE1/AE3 fue positiva en el citoplasma de los enterocitos, con una coloración más intensa en la zona apical correspondiente al borde de cepillo, señalando la estructura del citoesqueleto en estas células. Los resultados mostraron que la inmunolocalización de los antígenos en el pez cebra fue muy similar a la reportada por otros autores en distintas especies, excepto en el caso de la caspasa 3, cuya distribución en el intestino pez cebra difería de la observada en el salmón por otros investigadores. [GAL] O auxe da acuicultura resaltou a necesidade de comprender e optimizar a saúde intestinal dos peixes, xa que o intestino constitúe unha interface crucial entre o medio interno e externo. As alteracións, tanto no medio externo como no interno, poden ter repercusións negativas na saúde xeral dos animais de produción, o que subliña a importancia de reforzar a saúde intestinal. Neste contexto, o peixe cebra emerxeu como un modelo valioso en acuicultura, permitindo a avaliación de dietas e aditivos dietéticos de maneira máis eficiente e económica que as probas directas nos animais de produción. No presente traballo, utilizouse esta especie como organismo modelo para a avaliación de distintos marcadores relativos á saúde intestinal empregando a técnica inmunohistoquímica. En concreto, o obxectivo deste traballo é a posta a punto de técnicas inmunohistoquímicas para a detección de caspasa 3, antíxeno nuclear de células en proliferación (PCNA), citoqueratina AE1/AE3 e E-cadherina, en cortes histolóxicos de intestino de peixe cebra, dado que os protocolos comerciais non estaban probados para esta especie. O estudo mostrou que o PCNA localizábase principalmente entre os pregues intestinais, áreas ricas en células indiferenciadas, indicando alta proliferación. A caspasa 3, un marcador de apoptose, atopouse en células individuais distribuídas multifocalmente ao longo do pregue. A E-cadherina observouse nas áreas de contacto entre as células do epitelio, reflectindo o seu papel na adhesión celular. Por último, a citoqueratina AE1/AE3 foi positiva no citoplasma dos enterocitos, cunha coloración máis intensa na zona apical correspondente ao bordo de cepillo, sinalando a estrutura do citoesqueleto nestas células. Os resultados mostraron que a inmunolocalización dos antíxenos no peixe cebra foi moi similar á reportada por outros autores en distintas especies, excepto no caso da caspasa 3, cuxa distribución no intestino do peixe cebra difería da observada no salmón por outros investigadores.[ENG] The rise of aquaculture has highlighted the need to understand and optimize fish intestinal health, as the intestine constitutes a crucial interface between the internal and external environments. Alterations, both in the external and internal environments, can have negative repercussions on the overall health of production animals, underscoring the importance of strengthening intestinal health. In this context, the zebrafish has emerged as a valuable model in aquaculture, allowing for the evaluation of diets and dietary additives more efficiently and economically than direct testing in production animals. In this study, this species was used as a model organism for the evaluation of different markers related to intestinal health using immunohistochemistry. Specifically, the objective of this work is to establish immunohistochemical techniques for the detection of caspase 3, proliferating cell nuclear antigen (PCNA), cytokeratin AE1/AE3, and E-cadherin in histological sections of zebrafish intestine, given that commercial protocols had not been tested for this species. The study showed that PCNA is mainly located between the intestinal folds, areas rich in undifferentiated cells, indicating high proliferation. Caspase 3, a marker of apoptosis, was found in individual cells distributed multifocally along the fold. E-cadherin was observed in the contact areas between epithelial cells, reflecting its role in cell adhesion. Finally, cytokeratin AE1/AE3 was positive in the cytoplasm of enterocytes, with more intense staining in the apical zone corresponding to the brush border, indicating the cytoskeletal structure in these cells. The results showed that the immunolocalization of the antigens in zebrafish was very similar to that reported by other authors in different species, except for caspase 3, whose distribution in the zebrafish intestine differed from that observed in salmon by other researchers.