Colibacilosis y monitorización de antibiorresistencias en producción cunícola

Abstract

[ESP] Las patologías digestivas constituyen la principal causa de mortalidad, retrasos en el crecimiento, y pérdidas económicas en producción cunícola. Entre todas, la colibacilosis es la de mayor prevalencia, causante de enteritis y diarrea, así como de elevadas tasas de mortalidad y morbilidad en el período de destete, con graves pérdidas económicas para el sector. El carácter muchas veces plurietiológico, y la similitud de los signos clínicos dentro de estas patologías, junto con el incremento de bacterias multirresistentes (MDR), dificulta su diagnóstico y tratamiento. En la actualidad, la antibiorresistencia supone un desafío mundial que precisa de un abordaje One Health, comenzando por las granjas de producción animal, como reservorio potencial de bacterias MDR para el hombre y el medio ambiente. En el presente trabajo se abordó la problemática del diagnostico de la colibacilosis, la caracterización de las cepas de E. coli implicadas, y sus perfiles de antibiorresistencia (RAM), con el objeto de conocer la situación actual de esta enfermedad. Para ello, se analizaron 60 hisopos de contenido intestinal, tomados de manera individual de gazapos en período de cebo (30-60 días), durante los meses de agosto a octubre del 2023, procedentes de 10 explotaciones de 4 provincias españolas con problemas de diarreas. Las muestras se sembraron en MacConkey Lactosa, y mediante PCR se detectaron 29 (48,3%) confluentes positivos para cepas de Escherichia coli enteropatogénica (EPEC). De esos confluentes, se consiguieron recuperar colonias eae positivas de 21 muestras. El estudio genotípico de resistencias, mostró que el 38,1% de las 21 cepas EPEC eran portadoras del gen plasmídico mcr-1, codificador de la resistencia a la colistina. Además, en una de las cepas EPEC (4,8%) se identificó el gen blaCTX-M-9, codificador de una betalactamasa de espectro extendido (BLEE), capaz de hidrolizar cefalosporinas de amplio espectro. El estudio filogenético de la colección, mostró que todas las EPEC del estudio pertenecían al filogrupo B1. Por último, el ensayo de sensibilidad de la cepas mediante el método de concentración mínima inhibitoria (CMI), determinó que 19 de las 21 EPEC (90,5%) eran MDR, con las mayores prevalencias (>50%) frente a la tetraciclina, flumequine, enrofloxacino, trimetoprima/sulfametoxazol y neomicina. Concluímos que i) un diagnóstico específico de este patotipo, basado en la detección del gen eae codificador de la intimina, y el filogrupo, son clave para el control de la colibacilosis en cunicultura; ii) los niveles de MDR encontrados en las cepas EPEC de este estudio son muy elevados, lo que compromete el control terapéutico de esta patología; iii) dada la alta prevalencia del gen plasmídico mcr-1, es fundamental su monitorización, y evitar la transmisión de estas cepas a lo largo de la cadena de producción.[GAL] As patoloxías dixestivas constitúen a principal causa de mortalidade, atrasos no crecemento, e perdas económicas en produción cunícola. Entre todas, a colibacilose é a de maior prevalencia, causante de enterite e diarrea, así como de elevadas tasas de mortalidade e morbilidade no período de destete, con graves perdas económicas para o sector. O carácter moitas veces plurietiolóxico, e a similitude dos signos clínicos dentro destas patoloxías, xunto co incremento de bacterias multirresistentes (MDR), dificulta o seu diagnóstico e tratamento. Na actualidade, a antibiorresistencia supón un desafío mundial que precisa dun abordaxe One Health, comezando polas granxas de produción animal, como reservorio potencial de bacterias MDR para o home e o medio ambiente. No presente traballo abordouse a problemática do diagnóstico da colibacilosis, a caracterización das cepas de E. coli implicadas, e os seus perfís de antibiorresistencia (RAM), co obxecto de coñecer a situación actual desta enfermidade. Para iso, analizáronse 60 hisopos de contido intestinal, tomados de maneira individual de cazapos en período de cebo (30-60 días), durante os meses de agosto a outubro do 2023, procedentes de 10 explotacións de 4 provincias españolas con problemas de diarreas. As mostras sementáronse en MacConkey Lactosa, e mediante PCR detectáronse 29 (48,3%) confluentes positivos para cepas de Escherichia coli enteropatoxénica (EPEC). De esos confluentes, conseguíronse recuperar colonias eae positivas de 21 mostras. O estudo xenotípico de resistencias, mostrou que o 38,1% das 21 cepas EPEC eran portadoras do xene plasmídico mcr-1, codificador da resistencia á colistina. Ademais, nunha das cepas EPEC (4,8%) identificouse o xene blaCTX-M-9, codificador dunha betalactamasa de espectro estendido (BLEE), capaz de hidrolizar cefalosporinas de amplo espectro. O estudo filoxenético da colección, mostrou que todas as EPEC do estudo pertencían ao filogrupo B1. Por último, o ensaio de sensibilidad das cepas mediante o método de concentración mínima inhibitoria (CMI), determinou que 19 das 21 EPEC (90,5%) eran MDR, coas maiores prevalencias (>50%) frente á tetraciclina, flumequine, enrofloxacino, trimetoprima/sulfametoxazol e neomicina. Concluímos que i) un diagnóstico específico deste patotipo, baseado na detección do xene eae codificador da intimina, e o filogrupo, son clave para o control da colibacilose en cunicultura; ii) os niveis de MDR atopados nas cepas EPEC deste estudo son moi elevados, o que compromete o control terapéutico desta patoloxía; iii) dada la alta prevalencia do xene plasmídico mcr-1, é fundamental a súa monitorización, e evitar a transmisión destas cepas ao longo da cadea de produción.[ENG] Digestive pathologies are the main cause of mortality, growth delays, and economic losses in rabbit production. Among all, colibacillosis is the most prevalent, causing enteritis and diarrhoea, as well as high mortality and morbidity rates in the weaning period, with serious economic losses for the sector. The often multi-etiological nature and similarity of the clinical signs within these pathologies, together with the increase in multidrug-resistant bacteria (MDR), make their diagnosis and treatment difficult. Antimicrobial resistance is currently a global challenge that requires a One Health approach, starting with animal farms, as a potential reservoir of MDR bacteria for humans and the environment. In the present work, the problem of the diagnosis of colibacillosis, the characterization of the E. coli strains involved, and their antibiotic resistance profiles (AMR) were addressed, in order to know the current situation of this disease. To this end, 60 swabs of intestinal content were analyzed, taken individually from kittens in the fattening period (30-60 days), during the months of August to October 2023, from 10 farms in 4 Spanish provinces with diarrhea problems. The samples were planted in MacConkey Lactose, and 29 (48.3%) positive confluents for enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) strains were detected by PCR. From these confluents, positive eae colonies were recovered from 21 samples. The genotypic study of resistance showed that 38.1% of the 21 EPEC strains were carriers of the plasmid gene mcr-1, which encodes colistin resistance. In addition, in one of the EPEC strains (4.8%) the blaCTX-M-9 gene was identified, encoding an extended-spectrum beta-lactamase (ESBL), capable of hydrolyzing broad-spectrum cephalosporins. The phylogenetic study of the collection showed that all the EPECs in the study belonged to phylogroup B1. Finally, the strain susceptibility assay using the minimum inhibitory concentration (MIC) method determined that 19 of the 21 EPECs (90.5%) were MDR, with the highest prevalence (>50%) against tetracycline, flumequine, enrofloxacin, trimethoprim/sulfamethoxazole and neomycin. We conclude that i) a specific diagnosis of this pathotype, based on the detection of the intimin-encoding eae gene, and the phyllogroup, are key to the control of colibacillosis in rabbit farming; ii) the levels of MDR found in the EPEC strains in this study are very high, which compromises the therapeutic control of this pathology; iii) Given the high prevalence of the plasmid gene MCR-1, it is essential to monitor it, and to avoid the transmission of these strains throughout the production chain.