Desarrollo de un método basado en LAMP para la detección de serotipos de Salmonella en muestras de origen avícola

Abstract

[ESP] Salmonella spp. es uno de los principales patógenos de origen alimentario a nivel mundial, especialmente en productos avícolas, requiriendo un riguroso control a lo largo de la cadena alimentaria para proteger al consumidor. El método de referencia para su detección es la norma ISO 6579: 2017, un método dependiente de cultivo. Aunque es un método robusto, requiere de varios días para determinar la muestra como positiva y determinar el serotipo de Salmonella aislado, lo que enlentece el funcionamiento de la industria alimentaria y la respuesta a brotes alimentarios. Para solventar estas limitaciones en los últimos años se están desarrollando métodos alternativos como los basados en la amplificación de ácidos nucleicos. En este trabajo se desarrolló un método rápido de detección de los principales serotipos de Salmonella (Typhimurium, Enteritidis, Infantis, Virchow, Hadar) en productos avícolas, combinando un enriquecimiento rápido de la muestra con el empleo de la técnica molecular isotérmica LAMP. Los resultados se compararon con el método de referencia basado en la norma ISO 6579:2017, aplicando la determinación del serotipo mediante LAMP en los siguientes puntos: preenriquecimiento (agua de peptona), enriquecimiento selectivo (MSRV), agar selectivo y diferencial (XLD y RAPID´Salmonella). En las muestras de preenriquecimiento se realizó una extracción de ADN mediante lisis térmica. Para el resto se realizó el análisis sin una extracción previa de ADN. Fue posible determinar el serotipado en todos los puntos analizados. Además fue posible realizar el LAMP a partir de los medios selectivos sin extracción previa de ADN, aunque hubo diferences en los tiempos de amplificación entre los diferentes medios. El empleo de una versión colorimétrica del LAMP permite realizar la determinación del serotipo empleando como único equipo un termobloque. Esto hace que el método puede ser aplicado directamente en puntos de interés, como las propias granjas avícolas.[GAL] Salmonella spp. é un dos principais patóxenos de orixe alimentario a nivel mundial, especialmente en productos avícolas, requerindo un riguroso control ao longo da cadea alimentaria para protexer ao consumidor. O método de referencia para a súa detección é a norma ISO 6579: 2017, un método dependente de cultivo. Aunque é un método robusto, require de varios días para determinar a mostra como positiva e determinar o serotipo de Salmonella aislado, o que enlentece o funcionamento da industria alimentaria e a resposta a brotes alimentarios. Para solventar estas limitacións nos últimos anos estanse a desenvolver métodos alternativos como os baseados na amplificación de ácidos nucleicos. Neste traballo desenvoloveuse un método rápido de detección dos principais serotipos de Salmonella (Typhimurium, Enteritidis, Infantis, Virchow, Hadar) en productos avícolas, combinando un enriquecemento rápido da mostra co empleo da técnica molecular isotérmica LAMP. Os resultados compararonse co método de referencia baseado na norma ISO 6579:2017, aplicando a determinación do serotipo mediante LAMP nos seguintes puntos: preenriquecemento (auga de peptona), enriquecemento selectivo (MSRV), agar selectivo e diferencial (XLD y RAPID´Salmonella). Nas mostras de preenriquecemento realizouse unha extracción de ADN mediante lisis térmica. Para o resto realizouse o análise sen unha extracción previa de ADN. Foi posible determinar o serotipado en todos os puntos analizados. Ademais foi posible realizar el LAMP a partir dos medios selectivos sen extracción previa de ADN, aínda que houbo diferencias nos tempos de amplificación entre os diferentes medios. O empleo dunha versión colorimétrica del LAMP permite realizara determinación do serotipo empleando como único equipo un termobloque. Esto fai que o método poda ser aplicado directamente en puntos de interés, como as propias granxas avícolas.[ENG] Salmonella spp. é un dos principais patóxenos de orixe alimentario a nivel mundial, especialmente en productos avícolas, requerindo un riguroso control ao longo da cadea alimentaria para protexer ao consumidor. O método de referencia para a súa detección é a norma ISO 6579: 2017, un método dependente de cultivo. Aunque é un método robusto, require de varios días para determinar a mostra como positiva e determinar o serotipo de Salmonella aislado, o que enlentece o funcionamento da industria alimentaria e a resposta a brotes alimentarios. Para solventar estas limitacións nos últimos anos estanse a desenvolver métodos alternativos como os baseados na amplificación de ácidos nucleicos. Neste traballo desenvoloveuse un método rápido de detección dos principais serotipos de Salmonella (Typhimurium, Enteritidis, Infantis, Virchow, Hadar) en productos avícolas, combinando un enriquecemento rápido da mostra co empleo da técnica molecular isotérmica LAMP. Os resultados compararonse co método de referencia baseado na norma ISO 6579:2017, aplicando a determinación do serotipo mediante LAMP nos seguintes puntos: preenriquecemento (auga de peptona), enriquecemento selectivo (MSRV), agar selectivo e diferencial (XLD y RAPID´Salmonella). Nas mostras de preenriquecemento realizouse unha extracción de ADN mediante lisis térmica. Para o resto realizouse o análise sen unha extracción previa de ADN. Foi posible determinar o serotipado en todos os puntos analizados. Ademais foi posible realizar el LAMP a partir dos medios selectivos sen extracción previa de ADN, aínda que houbo diferencias nos tempos de amplificación entre os diferentes medios. O empleo dunha versión colorimétrica del LAMP permite realizara determinación do serotipo empleando como único equipo un termobloque. Esto fai que o método poda ser aplicado directamente en puntos de interés, como as propias granxas avícolas.