RT Generic
T1 Estudio de la influencia del calcio en la activación de la respuesta inflamatoria
A1 Álvarez Riesgo, Elisa
K1 calcio
K1 inflamación
K1 tapsigargina
K1 retículo endoplasmático
K1 mitocondria
K1 macrófagos
K1 calcium
K1 inflammation
K1 thapsigargin
K1 endoplasmic reticulum
K1 mitochondria
K1 macrophages
K1 tapsigarxina
AB [SPA] El calcio es un segundo mensajero crucial en numerosos procesos celulares como el metabolismo energético o la activación del sistema inmune. La comunicación que se establece entre la mitocondria y el retículo endoplasmático (RE) para regular sus niveles intracelulares es esencial para el correcto funcionamiento celular y se altera en situaciones de estrés como la inflamación. En este Trabajo Fin de Grado se estudió el papel del calcio en la activación de la respuesta inflamatoria mediante su modulación con tapsigargina (Tg), un compuesto inhibidor irreversible y selectivo de la bomba Ca2+ -ATPasa del RE. Inicialmente, se analizó el efecto de la Tg sobre la viabilidad celular en macrófagos de la línea celular RAW 264.7, obteniéndose una concentración inhibitoria 50 de 0,1 μM tras 24 h de tratamiento. A continuación, se cuantificó la liberación del factor de necrosis tumoral α tras 24 h de tratamiento con Tg, obteniéndose una liberación significativa a concentraciones de 0,1 y 0,01 μM. Seguidamente, se analizó el efecto de este fármaco sobre los niveles de calcio citosólico libre mediante el indicador fluorescente Fura-2AM. Se observó un incremento inicial de calcio citosólico correspondiente con el vaciamiento del RE que causa la Tg, seguido de un leve descenso provocado por la recaptación mitocondrial de Ca2+ y después un aumento debido a la apertura de los canales de calcio dependientes de reservorio. Por último, se evaluó el efecto de la Tg sobre el metabolismo energético, observándose una reducción significativa de la producción del ATP total debido a la disrupción mitocondrial por la sobrecarga de calcio. Además, se detectaron indicios de recuperación celular, asociados a la activación de la glucólisis anaerobia como mecanismo compensatorio. Estos resultados confirman que la modulación del calcio en macrófagos provoca una activación de la respuesta inflamatoria y afecta al metabolismo energético, especialmente a la función mitocondrial.[ENG] Calcium is a crucial second messenger in numerous cellular processes, such as energy metabolism and immune system activation. The communication between mitochondria and the endoplasmic reticulum (ER) to regulate its intracellular levels is essential for proper cell function and is disrupted under stressful situations like inflammation. This Final Degree Project studied the role of calcium in the activation of the inflammatory response through its modulation with thapsigargin (Tg), an irreversible and selective inhibitor of the ER-Ca2+-ATPase pump. Initially, the effect of Tg on cell viability was analyzed in macrophages from RAW 264.7 cell line, obtaining a half inhibitory  concentration of 0.1 μM after 24 h of treatment. Next, the release of tumor necrosis factor α was quantified after 24 h of treatment with Tg, obtaining a significant release at concentrations of 0.1 and 0.01 μM. The effect of this drug on free cytosolic calcium levels was then analyzed using the fluorescent indicator Fura-2AM. An initial increase in cytosolic calcium was bserved, corresponding to the ER emptying caused by Tg, followed by a slight decrease caused by mitochondrial Ca2+ reuptake and then an increase due to the opening of store-operated channels. Finally, the effect of Tg on energy metabolism was evaluated, revealing a significant reduction in total ATP production due to the mitochondrial disruption caused by calcium overload. Furthermore, signs of cellular recovery were detected, associated to the activation of anaerobic glycolysis as a compensatory mechanism. These results confirm that calcium modulation in macrophages triggers an activation of the inflammatory response and affects energy metabolism, particularly mitochondrial function.[GLG] O calcio é un segundo mensaxeiro crucial en numerosos procesos celulares, como o metabolismo enerxético e a activación do sistema inmunitario. A comunicación entre as mitocondrias e o retículo endoplasmático (RE) para regular os seus niveis intracelulares é esencial para o correcto funcionamento celular e vese alterada en situacións de estrés como a inflamación. Este Traballo Fin de Grao estuda o papel do calcio na activación da  resposta inflamatoria a través da súa modulación con tapsigarxina (Tg), un inhibidor irreversible e selectivo da bomba de Ca2+-ATPasa do RE. Inicialmente, analizouse o efecto da Tg sobre a viabilidade celular en macrófagos da liña celular RAW 264.7, obtendo unha concentración inhibitoria 50 de 0,1 μM despois de 24 h de tratamento. A continuación, cuantificouse a liberación do factor de necrose tumoral α despois de 24 h de tratamento con Tg, obtendo unha liberación significativa a concentracións de 0,1 e 0,01 μM. Analizouse entón o efecto deste fármaco sobre os niveis de calcio citosólico libre utilizando o indicador fluorescente Fura-2AM. Observouse un aumento inicial do calcio citosólico, correspondente ao baleirado do RE causado pola Tg, seguido dunha lixeira diminución causada pola recaptación de Ca2+ mitocondrial e, a continuación, un aumento debido á apertura dos canais de calcio regulados por reservorio. Finalmente, avaliouse o efecto da Tg no metabolismo enerxético, revelando unha redución significativa na produción total de ATP debido á disrupción mitocondrial causada pola sobrecarga de calcio. Ademais, detectáronse signos de recuperación celular, asociados á activación da glicólise anaerobia como mecanismo compensatorio. Estes resultados confirman que a modulación do calcio nos macrófagos desencadea unha activación da resposta inflamatoria e afecta ao metabolismo enerxético, en particular á función mitocondrial.
YR 2025
FD 2025
LK https://hdl.handle.net/10347/44244
UL https://hdl.handle.net/10347/44244
LA spa
NO Traballo Fin de Grao en Bioquímica. Curso 2024-2025
DS Minerva
RD 18 abr 2026