Desarrollo de nuevas técnicas inmunológicas y moleculares para la detección de citoquinas en ganado vacuno y su aplicación al estudio de la respuesta inmune en la hipodermosis bovina

Abstract

En el capítulo 1, estudiamos la respuesta celular en el tejido subcutáneo del dorso; para ello, se analizaron, mediante histología e inmunohistoquímica, muestras de piel de tres vacas infestadas de forma natural. Durante la etapa dorsal de la hipodermosis, se distinguen tres tipos de lesiones en función de la integridad de la larva y las células inflamatorias presentes. En el capítulo 2, se puso a punto y empleó una técnica de enzimoinmunoanálisis de recuento de puntos (ELISPOT) para la detección de células secretoras de IFN-γ en cultivos de células mononucleares de sangre periférica (CMSP) de animales sensibilizados y no sensibilizados frente a Hypoderma, cuyos sobrenadantes se emplearon para la determinación de IFN-γ por ELISA sándwich. En el capítulo 3, con el objetivo de determinar “in vitro” el efecto regulador del IFN-γ y la IL-4 en la respuesta proliferativa frente a los antígenos de H. lineatum y en la secreción de IL-10, se realizaron cultivos de CMSP de terneros. En el capítulo 4 se puso a punto un protocolo de RT-qPCR para la detección y cuantificación de la expresión de IFN-γ, IL-10, IL-4 y TNF-α en cultivos de CMSP de ganado vacuno. Al comparar los resultados de RT-qPCR, ELISA y ELISPOT, se observó una correspondencia entre técnicas. Los animales previamente sensibilizados presentan mayores niveles de expresión-secreción de citoquinas. El efecto inmunosupresor de los antígenos de Hypoderma se puso de manifiesto con las tres técnicas, presentando la RT-qPCR un límite de detección más bajo.