Actividades canónicas y no canónicas de la resolvasa de uniones de Holliday Yen1

Abstract

Las uniones de Holliday son estructuras de cuatro cadenas de DNA que suponen un obstáculo para la segregación cromosómica. Entre las enzimas capaces de eliminar estos intermediarios recombinatorios se encuentran las endonucleasas selectivas de estructura GEN1 y Yen1. A pesar de que éstas han sido identificadas como las resolvasas canónicas en humano y Saccharomyces cerevisiae, respectivamente, solamente GEN1 ha sido caracterizada en profundidad, mientras que hasta la fecha no se ha demostrado que Yen1 cumpla con las características que definen la resolución canónica: que los cortes sobre las uniones de Holliday se lleven a cabo de manera simétrica y coordinada, dando lugar a dos productos mellados con capacidad de religar. En esta Tesis se presenta la primera caracterización bioquímica exhaustiva de esta resolvasa, en la que se analizan las propiedades de la resolución canónica para Yen1 y se revelan algunas actividades no canónicas no descritas antes para esta enzimaHolliday junctions are 4-way branched DNA structures that hinder chromosome segregation. Among the enzymes that eliminate these recombination intermediates we find the structure-selective endonucleases GEN1 and Yen1. Despite being identified as canonical resolvases in humans and Saccharomyces cerevisiae, respectively, only GEN1 has been extensively characterized, while, to date, it has not been demonstrated whether Yen1 fulfills the properties that define canonical resolution: symmetricity and coordination of cleavage, and the generation of DNA products that can be readily ligated. The first biochemical characterization of this resolvase is presented in this Thesis, in which the properties of canonical resolution are analyzed for Yen1, and new, previously unidentified non-canonical activities of this enzyme are revealed